Introducción:
Existe un gran
desconocimiento entre los veterinarios que hacen trabajos de campo sobre los
diferentes procedimientos, metodología, materiales, tipo, bioseguridad y tiempo
de toma de muestras para remitir al laboratorio y que éste se convierta en la
herramienta básica para obtener un diagnóstico clínico eficaz.
Normas para un correcto
muestreo:
Para
la adecuada toma, manejo, conservación y envío de las muestras, es
indispensable tener que el técnico tenga las siguientes normas:
- Revisar y verificar la identificación de la totalidad de los animales del predio.
- Cerciorarse
de que el predio cuente con un corral en perfecto estado, una manga adecuada y
un mínimo de dos ayudantes
Toma de muestras sanguineas en bovinos - Acordar fecha y hora a intervenir
- Asegurarse de que todos los animales estén listos a la hora convenida.
- Tipo de vacuna utilizada
- Si los animales han recibido tratamientos y vacunaciones previas
- Si el predio ingresa en programas sanitarios oficiales con lo que se tomará en cuenta tipos de vacunas
- Informar al propietario de la disposición de notificar primero a Agrocalidad si existen animales positivos a brucelosis y/o tuberculosis bovina
- Toda muestra debe ser remitida con su historia clínica completa y perfectamente identificada. El laboratorio no procesará muestras que no cumplan con esta condición.
- Las muestras ideales se obtienen de animales vivos en distintos estadios de la enfermedad. Si es necesaria la necropsia, ésta debe guardar un orden y metodología adecuadas; además, debe realizarse en el menor tiempo posible después de la muerte del animal (1 hora).
- Las muestras para estudios bacteriológicos deben tomarse antes de la administración de medicamentos y empleando siempre material estéril. Para evitar que la muestra se seque y lograr una adecuada conservación, en algunos casos es necesario utilizar medios de transporte.
- Para la recolección de cualquier otro tipo de muestra, utilizar material limpio y seco.
- Los envases utilizados para el envío de muestras deben ser en lo posible irrompibles, herméticos y de dimensiones adecuadas.
- Las precauciones a considerar varían con la clase de muestra, temperatura ambiente, transporte y duración del viaje; en líneas generales, el tiempo entre la obtención de la muestra y su llegada al laboratorio no debe extenderse más de 24 horas.
- Todos los animales deberán estar identificados correctamente de forma que puedan tomarse de ellos nuevas muestras.
- Todas las muestras deberán enviarse al laboratorio acompañadas por los protocolos apropiados. Estos documentos contendrán datos de los antecedentes de los animales de donde procedan las muestras y de los signos clínicos o de las lesiones observadas en la necropsia.
- Deberá darse información clara sobre la edad, la categoría y la explotación de origen de los animales de donde proceden las muestras.
- Junto con la marca inequívoca de identificación, se registre la ubicación en la explotación de cada animal utilizado en el muestreo.
Materiales para
muestreo:
Es indispensable que todo el personal técnico que realiza toma de
muestras y envío al laboratorio tenga un maletín con el mínimo indispensable de
materiales para muestreo y envío de muestras como se detalla a continuación:
- Ropa de protección
- Cajas térmicas
- Gel Refrigerante
- Fundas plásticas de varios tamaños
- Fundas plásticas con cierre hermético
- Guantes de látex o nitrilo
- Algodón.
- Gradilla.
- Esferográficos y lápiz.
- Marcador para acetato.
- Cinta masquin.
- Cinta de embalaje.
- Tabla apoyamanos
- Fichas o formularios para identificación
- Hisopos estériles de diferentes tamaños.
- Frascos estériles, herméticos de boca ancha con tapa.
- Tubos estériles con tapa.
- Jeringuillas descartables (de 3 ml., 5 ml., 10 ml., 20 ml.)
- Agujas descartables de toma múltiple (calibre de aguja: G18, G20, G22 de 1 ½, 2, 2 ½ pulgadas).
- Tubos Vacutainer (de 5 ml., 10 ml.)
- Camisa o capuchón para vacutainer
Toma de Muestras
para Serología:
Para que una
pruebas serológica sea eficaz, acorde a lo que busca el médico veterinario de
campo, las muestras de sangre deben ser tomadas con cierto criterio para evitar
futuras malas interpretaciones de los resultados.
Primero, el sitio
de punción: en cualquier especie animal, la sangre que proviene de grandes
vasos son la muestra ideal, ya que ésta contará con la mayor concentración de
anticuerpos que es lo que se busca, pero por facilidades de trabajo se tendrán
otras opciones, así tendremos:
- En pequeñas especies se suelen usar las venas cefálica, yugular y safena, con agujas calibre 20 a 24;
- En bovinos se utilizan las venas yugular y coccígea (evitar vena mamaria) con agujas calibre 18 a 20;
- Los cerdos se sangran en la vena de la oreja o del golfo de las yugulares con agujas calibre del 18 al 20,
- Para ovinos, caprinos y equinos se usa la vena yugular con agujas calibre del 18 a 20.
- En ratas y ratones se puede obtener un poco de sangre del plexo infraorbitario (procedimiento cruel),
- Conejos se puede utilizar la vena marginal de la oreja.
- En aves, las venas radial o alar en aves adultas o punción cardíaca en aves pequeñas o jóvenes.
- En delfines y ballenas se usan las venas profundas de las aletas.
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PRINCIPALES SITIOS DE EXTRACCIÓN Y CANTIDAD
DE SANGRE CIRCULANTE
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ESPECIE
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CANT. SANGRE / Kg PESO VIVO
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SITIOS DE EXTRACCIÓN (vena, arteria,
corazón)
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Oreja
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Femoral
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Caudal o coccígea
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Yugular
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Mamaria
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Corazón
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Radial o alar*
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BOVINO
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60 ml. / Kg.
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+++
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+++
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++
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-
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OVINO
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60 ml. / Kg.
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+
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+++
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-
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-
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-
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CAPRINO
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70 ml. / Kg.
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+
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-
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+++
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-
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-
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-
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PORCINO
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65 ml. / Kg.
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++
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-
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+++
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-
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+++
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EQUINO
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75 ml. / Kg.
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-
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-
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+++
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-
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-
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AVES
(pollo)
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60 ml. / Kg.
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+++
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+++
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No
recomendado
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+
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Alternativa
posible
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++
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Vía
aceptable
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+++
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Vía
preferente
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*
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Alar (vena
radial)
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Manejo de la muestra sanguínea:
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| Sangre entera |
Evitar en lo
posible que haya hemólisis, se logrará utilizando tubos y agujas limpios, de
preferencia vacutainer, evitar el empleo de material sucio o húmedo, quitar la
aguja de la jeringa antes de depositar la sangre en un tubo, no mezclar
rápidamente la sangre con el anticoagulante y que la muestra sea depositada
suavemente por la pared del tubo.
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| Centrifugado de sangre |
Dependiendo del
diagnóstico que se quiera hacer, algunas muestras requieren sangre completa,
tal es el caso de una pruebas de ELISA para antígenos (PPC), mientras que otras
requieren ya sea plasma o suero. En este caso es importante saber qué tipo de anticoagulante
es mejor para las pruebas requeridas.
Para un estudio
hematológico o para verificar la presencia de hemoparásitos, se requiere sangre
con anticoagulante más un frotis sanguíneo secado al aire, plasma para estudios
de coagulación y suero para la mayoría de las estimaciones químicas clínicas y
de titulación de anticuerpos.
Cabe recalcar que
el suero sanguíneo se obtiene de la porción no celular de sangre coagulada,
centrifugada o dejando a decantar por contracción del coágulo por un tiempo
prudente, y el plasma sanguíneo es la porción no celular de sangre sin coagular,
con anticoagulante y centrifugada o dejada en decantación por un tiempo
prudente. Es bueno indicar que en ambos casos, suero y plasma, debe ser lo más
claro posible, sin indicios de hemólisis.
Suero sanguíneo:
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| Suero Sanguíneo |
Una vez recolectada
la sangre dentro de los tubos al vacío (vacutainer con tapa rojo) sin
anticoagulante, contenido aproximado de 5 a 10 ml, dejar reposar, no refrigerar
inmediatamente, colocar los tubos en posición horizontal o en aproximadamente
45 grados, dejamos reposar por un tiempo prudente o hasta ver la separación de
suero, inmediatamente separar el suero y colocarlos en tubos de 2.0 ml y
refrigerar para posterior remisión al laboratorio.
Siempre se deberá
tener cuidado de no exponer los sueros o la sangre completa o cualquier muestra
directamente al calor o la acción directa de los rayos solares, ya que afectan
la integridad de la muestra.
Si no se dispone de
tiempo hasta que se separe el suero, se deberá acudir a un sitio donde se
disponga de centrífuga, trasladar en un contenedor adecuado con gel
refrigerante. Una vez en el laboratorio, centrifugar a 2000-3000 rpm por 10
minutos, luego de esto separa el suero sobrenadante en tubos de 2.0 ml para su
posterior envío al laboratorio.
Si no se dispone
tiempo para enviar los sueros al laboratorio, estos pueden ser congelados a
-20°C. por tiempo indefinido, tratar en lo posible de no congelar y descongelar
un suero de manera repetida, ya que esto también afecta la integridad e las
proteínas. Nunca congelar sangre completa.
Si no se separa
inmediatamente el suero del coágulo de la sangre, puede llevar a cambios en la
composición del suero debido a la pérdida de hemoglobina y otros componentes celulares (potasio y
fósforo) de los eritrocitos, esto interferirá en el diagnóstico por lo que el
laboratorio puede descartar este suero.
Sangre completa:
Los anticoagulantes
comúnmente utilizados para la recolección de sangre completa son:
- La sal tripotásica del anticoagulante ácido etilendiamino tetraacético (EDTA, tubo con tapón lila), es el más recomendable para los procedimientos hematológicos de rutina, ya que producen mínimas alteraciones morfológicas de los leucocitos y eritrocitos y evita la agregación plaquetaria.
- La heparina (tubo con tapón verde), tiene una acción transitoria evitando la conversión de protrombina a trombina y la aglutinación de las células ocurre en 4 a 6 horas. También interfiere en la afinidad tintorial de los frotis sanguíneos. Indicada para pruebas e gamma interferón para diagnóstico de tuberculosis bovina.
- El fluoruro de sodio (tubos con tapón gris) generalmente se usa en estimación de glucosa, ácido pirúvico y ácido láctico en sangre, ya que el fluoruro inhibe la glucólisis y evita la disminución de la glucosa después de la recolección.
- El citrato de sodio (tubo con tapón azul) se utiliza para pruebas de coagulación en una solución al 3.8% relación una parte de anticoagulante y nueve partes de sangre. También se emplea en transfusiones sanguíneas; 1.32 g de dextrosa en 100 ml de agua destilada. Se añade esta solución en cuatro partes de sangre.
- El oxalato de sodio o de potasio deforma el núcleo, altera la afinidad tintoreal de leucocitos y facilita la aglutinación de plaquetas.
La sangre que
contiene anticoagulante de fluoruro no puede ser usada en pruebas donde se
emplean tiras reactivas para la estimación de glucosa debido a la inhibición de
la oxidación de la glucosa en la banda. El fluoruro también inhibe las enzimas
del plasma tales como lipasa, amilasa, AST y ALT:
Errores en la
toma de muestra:
a)
Lipemia:
El animal debe
estar en ayuno con un mínimo de 12 horas antes de la toma de muestra, de lo
contrario se produce la elevación artificial de algunas estimaciones como
hemoglobina, proteínas totales, amilasa, AST y ALT.
b)
Hemolisis:
Esta interfiere en
un amplio rango de pruebas como proteínas totales, lipasa, bilirrubinas, urea,
AST, ALT, FAS, y potasio entre otras.
c)
Estado fisiológico del animal:
Las muestras de
sangre deben obtenerse cuando el animal esta en reposo. La oxidación provoca
alteraciones en todo el hemográma.
Envío de muestras:
El método más común
de enviar muestras al laboratorio es por mensajería, aunque algunas muestras
todavía se mandan por correo o por transporte público.
Ya sea cualquier
método que se utilice, las muestras deberán ser empaquetadas de tal manera que
no se vaya a romper o salir, en especial si potencialmente incluyen agentes
zoonóticos.
Los tubos con
sangre deberán estar sellados en una bolsa de plástico y rodeados por un
material para empacar suave en un contenedor sólido.
Los portaobjetos
pueden romperse fácilmente en el trayecto y deberán ser presentados ya sea en
contenedores protectores de portaobjetos o forrados en papel seda y en una caja
sólida.
Las muestras deben
etiquetarse perfectamente con número o clave individual y utilizando tinta
indeleble o protegiéndola con cinta aislante y acompañarse de la historia
clínica que incluye los datos del animal (raza, sexo, edad), así como una breve
descripción del padecimiento, tratamiento, fecha y hora de la toma de muestra y
condiciones generales del animal.
Indicar al
laboratorio si el animal se encuentra en tratamiento con antibióticos en caso
de estudios de aislamiento bacteriano y antibiograma.
Además de un
correcto etiquetado e identificación de las muestras, la cantidad requerida en
el tipo de envase correcto para evitar derrames en especial cuando se trate de
enfermedades zoonósicas como tuberculosis, brucelosis, salmonelosis,
leptospirosis, etc., para evitar, por derrames, que el personal que manipula en
el laboratorio pueda contagiarse de alguna de estas enfermedades.
Embalaje:
El correcto embalaje
de muestras para envío al laboratorio deberá ajsutarse a la normativa del triple
empaque, esto es, que el embalaje debe
constar de tres componentes:
- Un recipiente primario (frasco o tubo), que contiene la muestra
- Un envoltorio secundario (caja térmica), impermeable; y
- Un envoltorio exterior rígido (caja de cartón).
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| Embalaje en triple empaque |
El recipiente o
recipientes primarios deben ser a prueba de filtrado (plásticos o de vidrio)
El envoltorio secundario
debe ser a prueba de filtrado (caja térmica de espuma flex o telgopor).
El recipiente
primario debe envolverse con material absorbente (papel).
Todo embalaje debe
tener la docuemntación adosada al exterior de la caja y constar todas las
etiquetas informativas y los datos de remitente, receptor y contenido
correctamente identificadas.
Además, si se envía
material biológico con riesgo para la salud humana y animal, deberá disponer de
la etiqueta que identifica al riesgo biológico.
Identificación:
Los tubos deberán
ser etiquetados y estar libres de cualquier otra identificación que no sea la
correspondiente al muestreo que se está realizando.
La identificación
de la muestra es primordial para el laboratorio y debe reunir los siguientes
datos:
- Nombre del propietario
- Dirección del predio
- Anamnesis (historial del animal-vacunaciones-tratamientos)
- Nombre o número del animal
- Raza
- Sexo
- Fecha y hora de recolección
Referencias:
Veterinary Clinical Pathology. K.G. Thompson. (2010).
Veterinary Laboratory Medicine; Clinical
Pathology. J. Robert Duncan, Keith W. Prasse. (2002).
